Fermentas RNase Inhibitor RNA酶抑制剂EO0381  的详细介绍

Fermentas RNase Inhibitor RNA酶抑制剂EO0381
产品信息：

特点

• 应用范围广，适合多种使用条件。
• 保护RNA，使其免受降解。zui高有效温度达55°C。

应用

• 抑制RNA降解，应用如下：
  一 体外转录（1）；
  一 cDNA合成（2）；
  一 体外翻译（3）；
  一 分离含有mRNA-蛋白复合物的哺乳动物细胞组分（3）;
  一 RNA扩增（4）。
• RNA纯化和保存。
• 分离和鉴定特殊的核酸酶活性（5）。
• 肿瘤抑制研究（6）。

说明

Ribolock™ RNase Inhibitor按1:1比例非竞争性与RNases A（见图1）、B和C结合，从而抑制RNases A、B和C的活性。但是其不能抑制真核生物RNases T1、T2、U1、U2、CL3和原核生物RNases I和H的活性。

来源

大肠杆菌菌株，含有编码哺乳动物核酸酶抑制剂的克隆基因。

分子量

49.6 kDa，单体。

活性单位定义

1个活性单位是指50%抑制5? ng RNase A活性所需Ribolock™ RNase Inhibitor用量。

抑制剂活性分析混合物：100 mM Tris-HCl （pH 7.5）, 1.2 mM EDTA, 0.1 mg/ml BSA, 100 ng/ml RNase A, 0.1 mg/ml [³H]-RNA, 50 mg/ml酵母RNA, 8 mM DTT。

保存缓冲液

保存缓冲液组分：
20 mM HEPES-NaOH （pH 7.5）, 50 mM NaCl, 8 mM DTT, 0.5 mM ELUGENT变性剂和50% （v/v）甘油。

质量控制

相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、磷酸酶、核糖核酸酶污染。功能测试方法为RNA和cDNA的合成。

抑制与失活

• 抑制剂：常用变性剂（SDS、尿素）和所有氧化剂（对-氯汞基苯甲酸盐、溶解氧、高氧化状态的离子）可强烈抑制RiboLock™ RNase Inhibitor并释放被结合的RNase。
• 失活：75°C加热10分钟；70°C加热10 分钟仍然可检测到活性残留。

备注

• 保存缓冲液中的DTT可确保Ribolock™ RNase Inhibitor长期保存的稳定性，其并非抑制剂活性发挥的必需品。
• 推荐浓度 – 1 unit/μl/μlμl反应体系。

图1。Ribolock™ RNase Inhibitor对RNase A的抑制效果分析。
37°C时，人RNA （1? μg）中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和不同量的RNase A（不含DNase和蛋白酶，#EN0531）。
M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
C1 – 人总RNA
C2 – 人总RNA，含RNase A
1-4 – 人总RNA，含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A

 

图2。Ribolock™ RNase Inhibitor热稳定性。
人的总RNA （1? μg）中添加20 u Ribolock™ RNase Inhibitor和50 pg RNase A（不含DNase和蛋白酶，#EN0531），不同温度条件下孵育。
M – RiboRuler™ High Range RNA Ladder
C1 – 人总RNA
C2 – 人总RNA，含RNase A
1-5 – 人总RNA，含RiboLock™ Ribonuclease Inhibitor和RNase A